如果需在凝膠成像系統(tǒng)上直接切膠,使用機(jī)器自帶的切膠裝置,,即可進(jìn)行切膠操作,。
1.電泳的buffer和gel都是新制的,切膠的臺子清理干凈,,刀片最好洗凈滅菌,,總之一句話就是保證切下的帶沒有外源dna污染。
2.切膠是要把整個目的片斷所在位置的膠全部回收,。為了減少膠的體積,,可以用相對比較薄的膠來做,只要夠點(diǎn)樣即可,,也可采用薄而寬的梳子來跑膠,。
3.關(guān)于防護(hù),在一般有機(jī)玻璃后就足夠了,,戴上防護(hù)面具以保護(hù)眼睛,,如果你戴樹脂眼鏡就可以了。要是非常害怕紫外照射,,或者對于膠有特殊要求,,例如要求不含EB,你可以采用點(diǎn)marker和帶刻度的尺子一起照相的方法來確定目的條帶在膠上的位置進(jìn)行切膠,。
按照正常程序點(diǎn)marker跑膠,,然后切下有marker的膠,,EB染色,紫外燈下與帶刻度的尺子一起照相,。由于要回收的帶與marker間的相對位置已知,,根據(jù)尺子來衡量未染色膠上目的帶的位置即可。如果覺得很難判斷,,可以直接在marker邊點(diǎn)少量的樣,,這樣位置就容易確定了。
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